今天上海晶抗要為您介紹的是血清分離方法。
·血清的分離
1.只有經(jīng)過嚴格培訓的人員才能進行這項工作。
2.操作時應戴手套以及眼睛和黏膜的保護裝置。
3.規(guī)范的實驗操作技術可以避免或盡量減少噴濺和氣溶膠的產(chǎn)生。血液和血清應當小心吸取，而不能傾倒。嚴禁用口吸液。
4.移液管使用后應*浸入適當?shù)南疽褐小Ｒ埔汗軕谙疽褐薪葸m當?shù)臅r間，然后再丟棄或滅菌清洗后重復使用。
5.帶有血凝塊等的廢棄標本管，在加蓋后應當放在適當?shù)姆缆┤萜鲀?nèi)高壓滅菌和/或焚燒。
6.應備有適當?shù)南緞﹣砬逑磭姙R和溢出標本
在細菌的血清鑒定中，zui常使用的方法是凝集反應，其基本原理是細菌為顆粒性抗原，當與相應的抗體混合時，在一定濃度的電解質(zhì)條件下，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。
玻片法凝集實驗是用診斷血清在玻片上與待測細菌相混合，在電解質(zhì)存在下，若出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊即為陽性，表示該菌為所用抗體的相應細菌。此法是一種定性實驗，方法簡便快速，特異性強。可用于鑒定菌種及菌型。用于鑒定細菌的診斷血清有以下幾種：
1.多價診斷血清：即混合診斷血清。該血清含有兩種(或型)以上細菌的相應抗體。一般用于細菌定群或初步分型。
2.單價診斷血清僅含一種(或型)細菌的相應抗體。可用于細菌的定種(或型)。
3.因子診斷血清細菌含有多種抗原成分，而且不同菌群細菌之間可有共同的抗原成分。因此，通過凝集吸收實驗，將抗血清中的共同抗體除掉，僅含一種特異性抗體的診斷血清稱為因子血清。可用于細菌分型。
[所需材料]
1.菌種豬霍亂沙門菌。
2.診斷血清沙門菌A-E多價血清，定群的6個O群因子血清，定型的H因子血清。
3.其他：0.9%氯化鈉溶液、載玻片等。
[操作方法]
1.取一潔凈載玻片，用記號筆劃兩個1—1.5cm的圓圈。
2.取1：5或1：10診斷血清一接種環(huán)置于玻片左側(cè)圈內(nèi)，在右側(cè)圈內(nèi)放一接種環(huán)0.9%氯化鈉作為對照。如天氣炎熱，環(huán)境溫度高，則應適當多取血清及0.9%氯化鈉，以防試劑短時間內(nèi)干涸，影響結(jié)果的觀察。
3.用接種環(huán)取待鑒定的新鮮細菌少許，分別研磨乳化于診斷血清及0.9%氯化鈉內(nèi)使之均勻混合。旋轉(zhuǎn)搖動玻片數(shù)次，1—3分鐘后觀察結(jié)果。
按上述操作方法，依次分別做A-E多價血清定屬，特異性O因子血清定群，H因子血清定型(或種)。
[結(jié)果]
陰性：對照側(cè)及實驗側(cè)均勻混濁不出現(xiàn)凝集。
陽性：鹽水對照側(cè)呈現(xiàn)均勻混濁，實驗側(cè)明顯凝集。
自凝：對照側(cè)及實驗側(cè)均出現(xiàn)凝集。
標本的檢測，常常還需要加作一個陽性對照。觀察結(jié)果時，先觀察陰性對照及陽性對照，兩個對照結(jié)果均符合實驗設計時，再觀察實驗孔。
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