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新生牛的血清
更新時間:2016-04-14   點擊次數(shù):1572次

1. 細(xì)胞培養(yǎng)法  
(1)非血吸附病毒檢查  
將新生牛血清供試品分別接種到人源(如人二倍體細(xì)胞)、猴源(如Vero細(xì)胞)以及牛腎傳代細(xì)胞三種細(xì)胞,采用的牛腎傳代細(xì)胞系應(yīng)證明無牛病毒的污染。每種細(xì)胞至少接種6瓶,每瓶細(xì)胞懸液接種量不少于培養(yǎng)液總量的25%。于36±1℃培養(yǎng)21天。接種的每種細(xì)胞都應(yīng)同時設(shè)立牛血清陰性對照和病毒陽性對照,陰性對照用牛血清應(yīng)證明無牛病毒污染。
培養(yǎng)過程中可根據(jù)細(xì)胞生長情況更換細(xì)胞培養(yǎng)液,每次更換培養(yǎng)液前應(yīng)觀察(肉眼/顯微鏡)有無細(xì)胞病變出現(xiàn)。培養(yǎng)到期后,陰性對照應(yīng)無任何細(xì)胞病變出現(xiàn),陽性對照應(yīng)出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變,試驗成立。供試品檢查應(yīng)不出現(xiàn)任何細(xì)胞病變?yōu)殛幮裕弦蟆?nbsp;
(2)血吸附病毒檢查  
將上述接種供試品的每種細(xì)胞取2瓶進(jìn)行血吸附病毒檢查。用0.2%~0.5%雞和豚鼠紅細(xì)胞混合懸液覆蓋于細(xì)胞表面,置2~8℃分鐘,然后置20~25℃30分鐘,分別進(jìn)行鏡檢,觀察紅細(xì)胞吸附情況, 供試品檢查結(jié)果均應(yīng)為陰性。試驗同時應(yīng)設(shè)立血吸附陽性對照。 
2. 免疫熒光抗體檢查法  
采用直接或間接免疫熒光抗體檢查法,至少應(yīng)對牛腹瀉病毒,牛腺病毒、牛細(xì)小病毒、呼腸孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒進(jìn)行檢查,結(jié)果均應(yīng)為陰性。

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